Cristalización de Macromoléculas

La cristalización de proteínas representa un cuello de botella en la determinación de estructuras mediante la difracción de rayos X. Además, no existe ninguna correlación simple entre el comportamiento de las proteínas y el gran número de parámetros que tienen que ser considerados para obtener cristales de proteína de calidad. En los servicios tecnológicos de La Factoría ofrecemos principalmente dos técnicas de cristalización para el barrido inicial de condiciones de cristalización de proteínas y complejos macromoleculares: difusión de vapor y contra difusión.

• Kits de cristalización por contradifusión (Triana Science and Tech). La Factoría tiene los más avanzados kits de cristalización por contradifusión (GCB-Domino) que permiten el screening exhaustivo de condiciones de cristalización, aprovechando todas las ventajas que esta técnica ofrece.

• Robot de cristalización por nanogotas (Hamilton Instruments). El robot permite el montaje de screens de cristalización por el método de difusión de vapor de gota sedente. Dispone de un sistema dual de brazos con 8 canales (1000 µl) y una cabeza co-Re-96 (300 µl), un co-re Grip, un nanopipetador y un brazo iSwap, un termo-sellador y el software “Screen_developer” con programas predefinidos para el diseño de las screens de refinamiento y optimización del proceso de cristalización.

Servicios Tecnológicos

Todos los screenings de cristalización incluyen un control previo de la calidad de la proteína o complejo que consiste en un análisis del estado de pureza y homogeneidad de la muestra por SDS PAGE y la determinación de la concentración de proteína. Además, se realiza un seguimiento de los experimentos de cristalización por microscopía óptica a las 24 horas, 3 días, 1 semana y 3 semanas.

1)   Para quienes que no saben dónde empezar su experimento de cristalización, ofrecemos tres packs de barridos de cristalización que hemos diseñado en función de la técnica empleada:

• Screening Pack de cristalización por difusión de vapor (30 µL de muestra): Este pack está basado en la técnica de la difusión de vapor por gota sedente e incluye tres placas de cristalización de 96 condiciones cada una.

• Screening Pack de cristalización por contra difusión (12 µL de muestra): Este pack está basado en la técnica de la contra difusión e incluye un barrido exhaustivo de concentraciones de 36 condiciones.

• Screening Pack combinado de cristalización (28 µL de muestra): Este pack combina 24 condiciones con la técnica de la contra difusión y tres placas de cristalización de 96 condiciones cada una con la técnica de la difusión de vapor.

2)   Para aquellos que saben qué tipo de barridos de cristalización desean, ofrecemos un abanico de placas de cristalización basadas en la técnica de la difusión de vapor:

• Placas de cristalización: Se puede seleccionar el número de placas deseadas.

3) Alternativamente, nos pueden contactar directamente si quieren que les diseñemos un barrido de cristalización personalizado para una proteína o complejo específico.